梅毒螺旋体属于密螺旋体属苍白密螺旋体(Treponema palliduMTP)的苍白亚种,是引起人类梅毒的病原体。检测抗梅毒螺旋体特异性抗体(TPAb)是梅毒筛查的常规方法,目前常用凝集试验(TPHA-苍白密螺旋体血凝试验、TPHA-苍白密螺旋体颗粒凝集试验)和酶免方法(EIA)两类。在进行TPAb检测的日常实践中,经常发现一些结果呈阳性的患者(特别是老年人),既无相应临床症状或体征,又否认梅毒感染史或感染史不清。对此,实验室往往难以给出令人信服的解释,以至于病人和临床医生对检验结果的可靠性提出质疑。
清华大学第一附属医院检验科对TPHA检测TPAb阳性的标本,应用EIA、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和免疫印迹法(western blot,册)进行了检测,以探讨无症状或体征的TPAb阳性结果是方法学导致的假阳性,还是可能存在隐性感染或梅毒痊愈后抗体的持续存在,为实验结果的合理解释提供依据。对100份 (实验组60例、对照组40例)阳性样本同时用TPHA、EIA、TRUST、册进行测定,以WB结果为标准进行对比分析(册法为目前免疫学实验参考方法,属确证性实验)。
结果判定:册法采用TpN47(UW47 000)、tmpA(MW45 000)、TpNl7(HWl7000)、TpNl5(HW 15 000)4种特异性抗原合肥特异性抗原p22,标本中有2种以上特异性抗体判定为阳性,只有1种特异性抗体判定为临界,没有特异性抗体或只有1种非特异性抗体均判定为阴性。为了便于对比分析,将册法特异性反应条带有浅到深分为三级,反应条带隐约可见为l+;反应条带清晰可见为2+;反应条带显色浓重为3+。
TPHA阳性标本WB分型:经WB法检测判定,实验组60例TPHA阳性样本中,阳性57例,临界2例,1例是与非特异性梅毒抗原p22反应的假阳性,阳性符合率为98%。对照组TPHA阳性结果与册法检测结果一致。佃法还证实40例对照组患者全部包含4种特异性抗体,且38例各特异性抗体条带反应强度均在2+以上,2例患者TpNl7或TpNl5为1+。
EIA法和TRUST检测结果 实验组60例TPHA阳性经WB法证实的57例阳性标本中,用EIA法检测,53例阳性,4例未检出抗体(阴性)。3例WB法判定为临界和阴性的标本,EIA法均为阴性。对照组40例,EIA检测全部为阳性。
实验组检出23例TRUST阳性病例,WB法全部为阳性,且含全部4种特异性抗体。对照组阳性病例中,TRUST阳性32例,WB法也全部为阳性,切含全部4种特异性抗体。
年龄影响 实验组---60岁TPHA阳性的老年患者,最终WB法判定阳性20例,占全部阳性的1/3。其中有18例患者包含全部4种特异性抗体,2例两例患者抗体分型为TpN47+tmpA+Tpnl7.18例含全部抗体的病例中,9例TRUST阳性和TRUST阳性老年患者WB法特异性抗体的条带反应强度无明显差别。与本组<60 岁的其他患者相比,老年患者的抗体型别分布和trust阳性率无明显差别。
对照组阳性病例年龄均小于60岁,其中小于30岁的有25例,大于50岁的有2例。
抗体类型影响 含全部4种特异性抗体病例,TPHA和EIA检测结果完全一致,且有较高的TRUST阳性率。
10例患者抗体类型不全者,均无TpNl5带JtTRUST均为阴性,其中7例TPHA和EIA法检测结果不一致。对特异性条带反映强度观察发现,5例具备TpN47和tmpA的患者中,TPn47和tmpA其中之—反映超过2+的2例患者,TPHA和EIA检测结果一致,TpN47和tmpA WB反应为1+的3例患者,EIA检测为阴性.另外5例患者,W33法检测只有TpN47,tpmA中一种特异性抗体或只有非特异性抗原p22的抗体,TOHA检测为弱阳性,而其中4例EIA检测为阴性。
结果分析:对实验组≥60岁20例老年患者结果分析显示,18例患者W13含全部抗体,活动性梅毒标志性抗体TpNl5阳性率达90%,9例TRUST阳性,应排除非特异性干扰的可能性。由于TRUST在晚期隐性梅毒检出率下降,对于WB实验含全部抗体而TpNl5,tmpA两种活动起梅毒标志性抗体,也不能简单认为该患者梅毒感染已治愈.或仅由于抗体未消失而导致梅毒抗体检测阳性,应该做进一步的实验室检查和临床观察.基于上述两种情况,无论是实验室人员,还是临床医生都不能忽视对老年梅毒抗体阳性患者的诊断和治疗。
本实验中TPHA和EIA两种方法的特异性均接近或达到100%,与文献的报告一致。对于普通病人的实验组,TPHA灵敏度高于EIA法,其差别在于抗体类型不全的10例患者中有7例两法检测结果不同,针对TpN47,tmpA的抗体消失或降低导致EIA法阴性。这也说明EIA敏感性虽然低于TPHA,但并不会对梅毒的诊断和治疗有明显影响。但文献报道,TpN47有一段序列(411-416)和人为连接蛋白存在较高的同源性,可导致某些自身免疫性疾病患者梅毒抗体检测发生交叉感染。另有文献认为类风湿因子,抗丙肝病毒抗体等也可干扰抗梅毒抗体的检测。虽然本试验相关疾病例数较少,但未发现自身免疫性疾病和妊娠等情况对TPHA和EIA产生明显的干扰,更为详尽的验证需进一步的研究。
通过对TPHA阳性结果用多种方法检测分析认为,临床上无症状和体征,本人又否认感染史。而TPHA和EIA法抗梅毒抗体阳性的患者,大多数是由于存在隐性感染和即往感染,仅极少数病例存在非特异性抗体干扰的可能。但对TRUST阳性或阴性结果,都应该进行综合分析,必要是用其他方法作进一步检查。
我科现使用的分析方法为EIA法,测定结果与文献报道基本一致。提供上述资料的目的是希望能对临床医师在诊断、鉴别、治疗的过程中能有所借鉴和帮助。